茯磚茶中金花菌菌落標準計數方法優化條件【試驗】（一）
茯磚茶內部或表面存在大量金黃色顆粒狀物質，俗稱“金花”；其數量的多少是判斷茯磚茶品質好壞的重要指標。由于地域的差異性，金花菌具有多樣性，但大都以冠突散囊菌為主，還包括謝瓦式散囊菌、阿姆斯特丹散囊菌、間型散囊菌及肋狀散囊菌等。其子囊果均為閉囊殼型，他們的共同特征是：培養前期（5 d～6 d），菌落質地緊密，中心顏色為黃色或棕褐色，周邊為淺黃色。目前，對金花菌的檢測一般均采用GB/T 4789.15-2016《食品安全國家標準食品微生物學檢驗霉菌和酵母計數》，該方法針對的是食品中霉菌和酵母菌的計數，而金花菌閉囊殼很難破裂，形成的菌落可能是2個～3個或更多個孢子生長發育而成，因此采用國標方法并不能準確地反映茯磚茶中金花菌的數量。
本試驗通過響應面法建立多元二次回歸方程來擬合因素與響應值之間的函數關系，充分考慮各因素之間的影響，通過前處理條件使金花菌閉囊殼充分破裂釋放子囊孢子，從而得到金花菌菌落總數計數的優化條件，為以后建立茯磚茶中金花菌標準計數方法提供試驗依據。
1材料與方法
1.1材料與設備
原料：茯磚茶，由咸陽涇渭茯茶有限公司提供。
FW100高速萬能粉碎機：天津泰斯特儀器有限公司；LDZX-50KBS立式壓力蒸氣滅菌鍋：上海申安醫療器械有限公司；SW-CJ-ID單人單面凈化工作臺：上海樹立儀器儀表有限公司；GHP-90隔水式恒溫培養箱：上海一恒科技有限公司；HZQ-C雙層空氣浴振蕩器：哈爾濱東聯電子技術開發有限公司。
培養基：孟加拉紅培養基，按GB/T 4789.15-2016配制。
1.2方法
1.2.1樣品的準備
采用GB/T 8302-2013《茶取樣》方法取樣。將整塊茶磚撬碎混勻，取部分混勻茶樣粉碎后備用，部分不粉碎茶樣作為對照樣品。
1.2.2菌落計數方法
采用GB/T 4789.15-2016方法。取已準備好的茶樣25.00 g于裝有無菌稀釋液的三角瓶中（內含200顆玻璃珠），經振搖后進行梯度稀釋，孟加拉紅培養基傾注平板，平板于（28±1）℃恒溫培養箱培養，第5天計數并拍照記錄。
1.2.3單因素試驗
1.2.3.1篩子目數對金花菌菌落總數的影響
茶樣粉碎，分別過篩40、50、60、70、80、90目，分別稱取過篩后的茶樣25.00 g于無菌蒸餾水中，振搖30 min（200 r/min）后進行梯度稀釋，孟加拉紅培養基傾注平板，（28±1）℃恒溫培養箱培養，第5天計數。
1.2.3.2無菌稀釋液濃度對金花菌菌落總數的影響
稱取過篩60目的茶樣25.00 g，分別加入無菌的蒸餾水、0.45%NaCl、0.85%NaCl、1.25%NaCl、1.65%NaCl、磷酸緩沖溶液中稀釋，振搖30 min（200 r/min）后進行梯度稀釋，孟加拉紅培養基傾注平板，（28±1）℃恒溫培養箱培養，第5天計數。
1.2.3.3振搖時間對金花菌菌落總數的影響
稱取過篩60目的茶樣25.00 g于無菌蒸餾水中，在轉速為200 r/min條件下，分別振搖20、30、40、50、60、70 min后，進行梯度稀釋，孟加拉紅培養基傾注平板，（28±1）℃恒溫培養箱培養，第5天計數。
1.2.4響應面試驗
在單因素試驗基礎上，以篩子目數、NaCl濃度、振搖時間為自變量，以金花菌菌落總數為響應值進行響應面試驗，中心試驗重復5次，共17個試驗點，試驗設計如表1所示。
表1因素水平表
2結果與分析
2.1單因素試驗結果
2.1.1篩子目數對金花菌菌落總數的影響
篩子目數對金花菌菌落總數的影響見圖1。
圖1篩子目數對金花菌菌落總數的影響
由圖1可知，篩子目數對金花菌菌落總數影響顯著。隨著篩子目數的減小，金花菌菌落總數呈增長趨勢，篩子目數從40目至80目，金花菌菌落總數呈直線增長，篩子目數為80目時，其菌落總數為（45.8±1.5）×105CFU/g；80目至90目，金花菌菌落總數趨于平緩，原因可能是高速粉碎機在粉碎過程中高速撞擊并產生熱量，當粉碎時間過長時容易導致金花菌孢子結構被破壞而失活。因此，篩子目數選用80目。