益生菌發(fā)酵葡萄糖酸鈉母液生長曲線測定與分析
本研究擬以提取葡萄糖酸鈉后的母液作為營養(yǎng)物質(zhì)，利用釀酒酵母菌、雙歧桿菌及乳酸菌獨特的糖類發(fā)酵能力，探討益生菌發(fā)酵葡萄糖酸鈉母液的可行性。以期在獲得大量益生菌提高葡萄糖酸鈉母液附加值，為葡萄糖酸鈉母液再利用提供方向。
生長曲線的測定
①挑取釀酒酵母、雙歧桿菌和乳酸菌分別接種于A培養(yǎng)液中，搖床震蕩過夜培養(yǎng)，以獲得處于生長對數(shù)期的活化種子液。
②將活化好的釀酒酵母菌、乳酸菌、雙歧桿菌、雙菌劑1和雙菌劑2按10%的接種量接入A培養(yǎng)液中，并置于37℃下培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；每隔4 h取樣，10倍梯度稀釋，并涂布平板。
③以培養(yǎng)時間（h）為橫坐標(biāo)，各時間所對應(yīng)的活菌濃度（CFU/ml）為縱坐標(biāo)，繪制各菌的生長曲線并計算代時[8]。
式中：t1、t2——選取微生物進入指數(shù)生長期后，細胞數(shù)量增長最快的兩個時間點（h）；
x1、x2——t1、t2時間點分別對應(yīng)的每毫升培養(yǎng)液中可培養(yǎng)的細胞數(shù)量（CFU/ml）。
益生菌生長曲線測定結(jié)果
將10%體積的釀酒酵母菌、雙歧桿菌、乳酸菌、雙菌劑1、雙菌劑2分別接種到A培養(yǎng)液后，測定生長曲線。為方便比較雙菌劑中的釀酒酵母菌生長，釀酒酵母菌在37℃條件下培養(yǎng)。單菌培養(yǎng)曲線見圖1～圖3。
從圖1酵母菌的生長曲線看出，釀酒酵母在A培養(yǎng)液中生長4 h左右進入對數(shù)期；培養(yǎng)至12 h，釀酒酵母菌到達穩(wěn)定期，最高濃度為7.5×107CFU/ml。37℃培養(yǎng)時，釀酒酵母菌在A培養(yǎng)液中的代時約為1.50 h。
從圖2雙歧桿菌的生長曲線數(shù)據(jù)得出，雙歧桿菌在37℃培養(yǎng)條件下，16 h時進入對數(shù)期；培養(yǎng)32 h達到穩(wěn)定期，雙歧桿菌活菌最高含量達到4.5×109CFU/ml。在A培養(yǎng)液，37℃培養(yǎng)，雙歧桿菌生長代時為1.36 h。
圖1釀酒酵母菌在A培養(yǎng)液中的生長曲線
圖2雙歧桿菌在A培養(yǎng)液中的生長曲線
圖3乳酸菌在A培養(yǎng)液中的生長曲線
乳酸菌單菌培養(yǎng)生長曲線見圖3。在A培養(yǎng)液中，37℃條件下，乳酸菌培養(yǎng)8 h進入對數(shù)期，12 h達到穩(wěn)定期。乳酸菌濃度最高達到5.7×109CFU/ml，由計算得出，在A液培養(yǎng)液中，37℃條件下，乳酸菌生長代時為0.81 h。
釀酒酵母菌和其他菌在進行雙菌培養(yǎng)時，有可能起到促進作用也有可能起到抑制作用。本試驗將雙歧桿菌、乳酸桿菌分別和釀酒酵母菌混合，等體積制成雙菌劑，接入A培養(yǎng)液中培養(yǎng)，繪制各自生長曲線。
圖4 BM1在A培養(yǎng)液中的生長曲線
圖5 BM2在A培養(yǎng)液中的生長曲線
雙歧桿菌和釀酒酵母菌混合接種到葡萄糖酸鈉母液后，37℃培養(yǎng)，定時取樣繪制生長曲線見圖4。
從圖4中可以看出，37℃培養(yǎng)條件下，雙歧桿菌和釀酒酵母菌兩種菌混合培養(yǎng)比各自單獨培養(yǎng)的生長曲線表現(xiàn)為適應(yīng)期延長，穩(wěn)定期拖后。混合培養(yǎng)時，雙歧桿菌最高濃度達到1.8×108CFU/ml，代時為1.80 h；釀酒酵母菌最高濃度達到3.5×107CFU/ml，代時為2.10 h。雙歧桿菌和釀酒酵母菌都比單獨培養(yǎng)時濃度降低（4.3×109CFU/ml和4.0×107CFU/ml），代時延長（0.44 h和0.60 h）。
乳酸菌與釀酒酵母菌等量混合后的菌液在A培養(yǎng)液中的生長曲線見圖5。
對比乳酸菌與釀酒酵母菌兩種菌單獨培養(yǎng)的生長曲線菌和混合培養(yǎng)生長曲線，可以看出混合后兩種菌同樣表現(xiàn)為適應(yīng)期延長，穩(wěn)定期拖后，濃度明顯低于各自單獨培養(yǎng)。乳酸菌與釀酒酵母混合培養(yǎng)時，乳酸菌最高濃度達到5.6×109CFU/ml，代時為1.42 h；釀酒酵母菌最高濃度達到3.8×107CFU/ml，代時為2.52 h，均比單獨培養(yǎng)時濃度降低（0.1×109CFU/ml和3.7×107CFU/ml），代時延長（0.61 h和1.02 h）。
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