怎么知道護手霜菌落總數(shù)有沒有超標【實驗】
檢測化妝品菌落總數(shù)時，為使菌落在培養(yǎng)基中清晰可辨，允許在卵磷脂、吐溫80-營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中添加2，3，5-三苯基氯化四氮唑（以下簡稱TTC）。文章以護手霜為樣品基質，分別加入適當菌含量的大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、酵母工作菌懸液，制備5mg/100mL濃度的TTC卵磷脂、吐溫80-營養(yǎng)瓊脂，同時以不添加TTC卵磷脂、吐溫80-營養(yǎng)瓊脂平板進行驗證，以營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基作為對照，對菌落計數(shù)結果進行對比。結論：添加了5mg/100mLTTC的培養(yǎng)基用于化妝品菌落總數(shù)檢測時對G+有明顯的抑制作用，建議在日常檢測過程中需慎重選擇。
化妝品中富含脂肪、蛋白質、氨基酸、維生素、無機鹽等營養(yǎng)成分，是微生物良好的碳源和氮源，為微生物的生長、繁殖提供了良好的條件。菌落總數(shù)是判定化妝品被污染程度的標志，在實際工作中，乳膏狀樣品常因檢驗樣品含有沉渣給菌落鑒別造成一定的困難。為了有利于菌落計數(shù)，在培養(yǎng)基中加入適量的TTC，它能被細菌還原成為紅色物質使菌落呈紅色[1]，目前化妝品的微生物學質量及檢驗方法依據(jù)《化妝品安全技術規(guī)范》（2015版），菌落總數(shù)的檢驗所用培養(yǎng)基為卵磷脂、吐溫80-營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，在必要時可以使用5mg/100mL TTC[2]。該濃度TTC對化妝品菌落總數(shù)測定是否有影響，文章通過實驗做一些探討。
1材料與方法
1.1培養(yǎng)基
5mg/100mL TTC卵磷脂吐溫80-營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：國藥集團化學試劑有限公司；磷脂吐溫80-營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：北京陸橋技術有限責任公司；營養(yǎng)瓊脂：北京陸橋技術有限責任公司；滅菌生理鹽水：國藥集團化學試劑有限公司。
1.2樣品
護手霜：淘寶。
1.3菌種
金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希氏菌ATCC25922、酵母ATCC9763、蠟樣芽孢桿菌ATCC11778，以上菌種均由北京陸橋技術有限責任公司提供。
1.4儀器
高壓滅菌器：日本HIRAYAMA；恒溫培養(yǎng)箱：微生物快速立體計數(shù)儀，BioSense；上海一恒科技有限公司；冰箱：海爾集團
2方法
2.1菌液的制備
分別接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、酵母、蠟樣芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至10mL營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，36℃培養(yǎng)24h，上述培養(yǎng)物用無菌生理鹽水度稀釋，制成每1mL含菌量在30～300CFU的菌懸液。菌液制備后，保存在2～8℃，在24h內使用。
2.2供試液的制備
取10g護手霜加入到裝有玻璃珠及90mL滅菌生理鹽水的三角瓶中，充分振蕩制成1：10供試液。
2.3實驗方法
2.3.1菌液試驗
分別取2.1中的菌液2mL，分別注入兩個平皿中，加入培養(yǎng)基，于36℃培養(yǎng)48h，測定菌液中的菌落數(shù)。
2.3.2樣品對照試驗
取2.2中的1：10供試液2mL，分別注入兩個平皿中，加入培養(yǎng)基，于36℃培養(yǎng)48h，測定樣品中的菌落數(shù)。
2.3.3驗證試驗
取2.2中的1：10供試液1mL和2.1中的菌液1mL分別注入同一平皿中，同時做平行，加入培養(yǎng)基，于36℃培養(yǎng)48h，測定菌落數(shù)。
3結果與討論
表1結果表明5mg/100mL TT C對革蘭氏陰性桿菌的生長繁殖無影響，但對革蘭氏陽性葡萄球菌有較強的抑制作用，結果顯示無細菌生長。酵母在36℃生長較差，且不顯色[3]。在實際工作中，菌落計數(shù)選擇在30～300CFU之間，菌落容易計數(shù)，沒必要加入TTC，減少TTC對細菌的毒性。如果遇到樣品含較多顆粒，需要添加TTC時可以參考陳得云[4]等試驗在每100mL培養(yǎng)基加入TTC濃度2～3mg，可使多數(shù)菌落顯色且不抑制細菌的生長。
4結論
應用TTC指示劑在化妝品菌落總數(shù)測定，便于區(qū)別化妝品中的顆粒與細菌，結果易于觀察，計數(shù)快速準確。《化妝品安全技術規(guī)范》（2015版）中用5mg/100mL濃度的TTC在試驗中菌落均能顯色（酵母除外），但對金黃色葡萄球及蠟樣芽胞桿菌有較強的抑制作用，故在使用TTC進行菌落計數(shù)會造成檢測結果誤差。