膠滴腫瘤藥敏檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)及評(píng)價(jià)不同藥物濃度的5'-DFUR對(duì)胃癌的療效（二）
2結(jié)果
2.1 Primage圖像分析結(jié)果
采用Primage圖像分析系統(tǒng)對(duì)膠滴圖像數(shù)據(jù)進(jìn)行讀取，原代腫瘤細(xì)胞團(tuán)在膠滴內(nèi)呈三維立體式增殖生長(zhǎng)，與腫瘤細(xì)胞在人體內(nèi)的生長(zhǎng)環(huán)境相似。與加藥組相比，Control組腫瘤細(xì)胞活性好，增殖較快；加藥組呈現(xiàn)出不同程度的細(xì)胞凋亡，主要表現(xiàn)為細(xì)胞團(tuán)變小且數(shù)量減少。（圖2）
圖2編號(hào)20170523-709標(biāo)本的Primage圖像分析結(jié)果（×40）
2.2實(shí)驗(yàn)組抗腫瘤藥物的CD-DST檢測(cè)結(jié)果
31例新鮮胃癌組織標(biāo)本中，26例可評(píng)價(jià)，檢測(cè)成功率為84%（26/31），5例檢測(cè)失敗原因?yàn)槟[瘤細(xì)胞含量低，生長(zhǎng)率低于0.8。檢測(cè)成功的26例中，隨著5'-DFUR濃度（3、5、10μg/ml）的增加，體外有效率（in vitro sensitivity，IVS）也呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，高敏感IVS分別為23%、31%和46%（表2），由于已報(bào)道CAP單藥的胃癌臨床有效率約為30%，因此，本研究結(jié)果表明，胃癌體外藥敏實(shí)驗(yàn)中，5μg/ml的5'-DFUR為CAP體外藥敏檢測(cè)CD-DST法的最適實(shí)驗(yàn)條件。
表2實(shí)驗(yàn)組抗腫瘤藥物的CD-DST檢測(cè)結(jié)果（n=26）
2.3驗(yàn)證組5'-DFUR的CD-DST檢測(cè)結(jié)果
由于實(shí)驗(yàn)過程中的胃癌標(biāo)本有限，為了進(jìn)一步驗(yàn)證胃癌中5'-DFUR的IVS與CAP臨床有效率的一致性，采用5μg/ml的5'-DFUR對(duì)另外34例胃癌標(biāo)本進(jìn)行了CD-DST法評(píng)價(jià)，其中1例檢測(cè)失敗，是由于腫瘤細(xì)胞量較少不足以檢測(cè)；33例可評(píng)價(jià)，檢測(cè)成功率為97%（33/34）。其中，高敏感IVS為30%（10/33），與實(shí)驗(yàn)組結(jié)果一致，即5μg/ml的5'-DFUR的IVS與CAP臨床有效率一致。
3討論
盡管臨床診斷和治療技術(shù)在不斷提高，但胃癌由于其高度異質(zhì)性、術(shù)后易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)，仍然是全球第三大癌癥死亡原因。術(shù)后輔助化療是胃癌治療中的重要組成部分，目前一般采用經(jīng)驗(yàn)性用藥，但是由于腫瘤的異質(zhì)性和患者的個(gè)體差異，導(dǎo)致療效差異顯著。隨著腫瘤個(gè)體化治療思想的提出，研究者建立了ATP生物熒光腫瘤體外藥敏檢測(cè)技術(shù)（ATP-tumor chemosensitivity assay，ATP-TCA）、MTT等體外藥敏檢測(cè)技術(shù)，但都存在一定的局限性。相較于上述方法，Kobayashi提出的CD-DST法具有原代細(xì)胞培養(yǎng)成功率高、需要的腫瘤細(xì)胞量少、臨床相關(guān)性高、操作簡(jiǎn)單、培養(yǎng)時(shí)間短以及避免成纖維細(xì)胞干擾等優(yōu)點(diǎn)。研究表明，CD-DST法對(duì)胃癌原代細(xì)胞在化療藥物敏感性檢測(cè)中取得了較理想的結(jié)果。
CAP、5'-DFUR以及5-FU是臨床上胃癌、結(jié)直腸癌輔助化療的常用藥，CAP與5'-DFUR以及5-FU相比，具有更好的安全性和有效性。但作為口服抗癌前體分子的CAP在腫瘤組織細(xì)胞內(nèi)選擇性地被TP代謝為5-FU，其療效已經(jīng)在多個(gè)臨床試驗(yàn)中確定，而且毒性小于5-FU，口服比持續(xù)靜脈注射更易被患者接受，因此，CAP可能是替代靜脈注射5-FU的理想選擇。在進(jìn)展期胃癌的化療中，CAP具有較高的抗癌活性，由于CAP的體外代謝受限，而5'-DFUR作為CAP重要的代謝產(chǎn)物，只需在腫瘤組織細(xì)胞中TP的作用下一步代謝即可轉(zhuǎn)化為發(fā)揮抗腫瘤作用的5-FU。為了胃癌患者術(shù)后采用CD-DST法進(jìn)行CAP體外藥敏實(shí)驗(yàn)，本研究選擇CAP的代謝產(chǎn)物5'-DFUR進(jìn)行CAP的CD-DST藥敏檢測(cè)實(shí)驗(yàn)條件探索。研究結(jié)果顯示，CD-DST法評(píng)價(jià)胃癌原代細(xì)胞對(duì)CAP的藥敏條件檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定，胃癌原代細(xì)胞對(duì)不同濃度5'-DFUR的敏感度差異明顯，5μg/ml的5'-DFUR在體外藥敏實(shí)驗(yàn)條件檢測(cè)中對(duì)胃癌的高敏感率為30%左右，這與文獻(xiàn)報(bào)道的臨床CAP單藥一線治療晚期胃癌的有效率一致。同時(shí)本研究結(jié)果顯示抗腫瘤藥物L(fēng)-OHP和CPT-11的單藥敏感率檢測(cè)結(jié)果與實(shí)際臨床單藥治療有效率相符。綜上結(jié)果表明，采用CDDST法評(píng)價(jià)分析CAP在胃癌術(shù)后輔助化療中的藥敏檢測(cè)條件對(duì)胃癌患者術(shù)后進(jìn)行體外藥敏實(shí)驗(yàn)及臨床化療藥物的選擇指導(dǎo)具有重要意義。
另有研究表明，CAP與第三代鉑類抗腫瘤藥物L(fēng)-OHP聯(lián)合用藥對(duì)晚期胃癌療效顯著，且不良反應(yīng)小，而CD-DST技術(shù)作為臨床指導(dǎo)用藥的重要參考，本實(shí)驗(yàn)室利用CD-DST法對(duì)CAP與L-OHP聯(lián)合用藥對(duì)腸癌原代細(xì)胞進(jìn)行了體外藥敏檢測(cè)實(shí)驗(yàn)條件探索，初步結(jié)果顯示，在腸癌中有效率約為55%，與文獻(xiàn)報(bào)道的年齡較小患者臨床有效率為58%和年齡較大患者臨床有效率為52%一致性較高。而CAP與L-OHP聯(lián)合用藥對(duì)胃癌的IVS及其藥敏檢測(cè)實(shí)驗(yàn)條件正在進(jìn)一步研究中。針對(duì)聯(lián)合用藥方案的CD-DST藥敏檢測(cè)實(shí)驗(yàn)條件及藥敏實(shí)驗(yàn)是今后研究的方向，旨在為腫瘤患者術(shù)后進(jìn)行體外藥敏實(shí)驗(yàn)及臨床化療藥物的選擇指導(dǎo)提供重要參考。
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