Bact/Alert 3D血培養(yǎng)儀原理、報(bào)陽(yáng)時(shí)間與生長(zhǎng)曲線測(cè)定
目的觀察Bact/Alert 3D血培養(yǎng)儀報(bào)陽(yáng)時(shí)間及生長(zhǎng)曲線，幫助做出正確的血培養(yǎng)初級(jí)報(bào)告及預(yù)測(cè)細(xì)菌的類型。方法對(duì)本院656例成人血培養(yǎng)報(bào)陽(yáng)時(shí)間及生長(zhǎng)曲線進(jìn)行分析。結(jié)果腸桿菌科的細(xì)菌、葡萄球菌、非發(fā)酵菌、鏈球菌和腸球菌、念珠菌及布魯菌報(bào)陽(yáng)時(shí)間依次延長(zhǎng)，生長(zhǎng)曲線各有特點(diǎn)。結(jié)論根據(jù)各類細(xì)菌在Bact/Alert 3D血培養(yǎng)儀中報(bào)陽(yáng)時(shí)間及生長(zhǎng)曲線特點(diǎn)，幫助做出正確的血培養(yǎng)初級(jí)報(bào)告及預(yù)測(cè)細(xì)菌的類型，協(xié)助臨床醫(yī)生快速準(zhǔn)確經(jīng)驗(yàn)用藥。
隨著血培養(yǎng)對(duì)臨床幫助越來(lái)越大，血培養(yǎng)送檢率也越來(lái)越高，但血培養(yǎng)結(jié)果回報(bào)太慢是臨床醫(yī)生對(duì)血培養(yǎng)滿意度最低之處。Bact/Alert 3D血培養(yǎng)儀報(bào)陽(yáng)時(shí)間與生長(zhǎng)曲線幫助微生物實(shí)驗(yàn)室做出正確的血培養(yǎng)初級(jí)報(bào)告及預(yù)測(cè)細(xì)菌的類型，在一定程度上提高了醫(yī)生對(duì)血培養(yǎng)的滿意度。
材料與方法
1.1標(biāo)本來(lái)源2014年1月-2015年12月期間我院在Bact/Alert 3D血培養(yǎng)儀上報(bào)陽(yáng)656例血培養(yǎng)標(biāo)本。
1.2儀器與試劑法國(guó)梅里埃Bact/Alert 3D血培養(yǎng)儀，成人中和抗生素需氧瓶；采用VITEK-2全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)。
1.3方法按臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程無(wú)菌采集左右手各8ml左右靜脈血注入成人中和抗生素需氧瓶中（由于沒(méi)有培養(yǎng)厭氧菌的能力與經(jīng)濟(jì)條件，我院只能實(shí)行‘一側(cè)一中和抗生素需氧瓶’的方案），立即送至微生物室放入Bact/Alert 3D血培養(yǎng)儀進(jìn)行培養(yǎng)。儀器報(bào)陽(yáng)時(shí)，先查閱陽(yáng)性瓶的報(bào)陽(yáng)時(shí)間及生長(zhǎng)曲線并做好記錄，接種轉(zhuǎn)種血平板和巧克力平板、麥康凱平板、沙堡弱平板，并做革蘭染色與濕片（看動(dòng)力），出初級(jí)報(bào)告，如“檢出革蘭陽(yáng)性球菌可能是葡萄球菌”或者“檢出革蘭陰性桿菌可能是腸桿菌科的細(xì)菌或者非發(fā)酵菌”、“檢出真菌孢子可能是念珠菌”。次日早上上班立即查看平板做快速、簡(jiǎn)單的鑒定，出二級(jí)報(bào)告，同時(shí)快速配好菌液上VITEK-2細(xì)菌鑒定儀進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)，下午下班前就可以出最終報(bào)告。
2結(jié)果
2.1報(bào)陽(yáng)時(shí)間656例報(bào)陽(yáng)標(biāo)本中，腸桿菌科的細(xì)菌262例，占40%；葡萄球菌223株，占34%；非發(fā)酵菌79株，占12%；鏈球菌52株，占8%；念珠菌20株，占3%；布魯菌7株，占1%；假陽(yáng)性13株，占2%。其報(bào)陽(yáng)時(shí)間見(jiàn)表1。
報(bào)陽(yáng)時(shí)間656例報(bào)陽(yáng)標(biāo)本中，腸桿菌科的細(xì)菌262例，占40%；葡萄球菌223株，占34%；非發(fā)酵菌79株，占12%；鏈球菌52株，占8%；念珠菌20株，占3%；布魯菌7株，占1%；假陽(yáng)性13株，占2%。其報(bào)陽(yáng)時(shí)間見(jiàn)表1。
表1各類微生物報(bào)陽(yáng)時(shí)間
2.2各類微生物在Bact/Alert 3D血培養(yǎng)儀上生長(zhǎng)曲線特點(diǎn)見(jiàn)圖1、圖2。
圖1各類微生物的生長(zhǎng)曲線
3討論
圖2用過(guò)抗生素的生長(zhǎng)曲線
Bact/Alert 3D血培養(yǎng)儀原理是當(dāng)培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)有微生物生長(zhǎng)，代謝過(guò)程中產(chǎn)生的二氧化碳可通過(guò)半透膜滲透至瓶底，與固定于瓶底的感應(yīng)器結(jié)合，指示劑產(chǎn)生顏色變化，經(jīng)光電檢測(cè)得知二氧化碳變化情況，自動(dòng)連續(xù)記憶并且制成生長(zhǎng)曲線圖，計(jì)算機(jī)接受此信息后，以加速度、起始值、速率三種方式來(lái)判斷陽(yáng)性與否[1]。具體的程序是儀器每10min檢測(cè)瓶底顏色的變化，已測(cè)定二氧化碳的絕對(duì)濃度達(dá)到3300反射光度或加速度達(dá)到32反射光度每10min，系統(tǒng)判斷陽(yáng)性[2]。由于血量、菌量、抗生素的使用及接種標(biāo)本時(shí)間等因素都會(huì)影響血培養(yǎng)生長(zhǎng)曲線，本文只能選擇典型的生長(zhǎng)曲線進(jìn)行分析，不是很全面。
腸桿菌科報(bào)陽(yáng)時(shí)間最短，而生長(zhǎng)曲線的遲緩期短，對(duì)數(shù)期十分迅速，平穩(wěn)期極短，有時(shí)甚至看不到并且其二氧化碳的絕對(duì)濃度都在4000反射光度以上。其形成上述特點(diǎn)是由于此類細(xì)菌一般為兼性厭氧，在對(duì)營(yíng)養(yǎng)條件要求不高，生長(zhǎng)期短，細(xì)菌繁殖快，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸且產(chǎn)氣，二氧化碳產(chǎn)生速度快而量多[3]。這些報(bào)陽(yáng)的腸桿菌科細(xì)菌中有一例特別的生長(zhǎng)曲線見(jiàn)圖二，雖然這例五天報(bào)陽(yáng)時(shí)間，但是其對(duì)數(shù)期十分迅速。出現(xiàn)這種生長(zhǎng)曲線的原因是患者在抽血培養(yǎng)前就使用過(guò)抗生素。
葡萄球菌報(bào)陽(yáng)速度僅次于腸桿菌科細(xì)菌，生長(zhǎng)曲線有一定的傾斜，圖形的遲緩期、生長(zhǎng)期、穩(wěn)定期都明顯可見(jiàn)。其形成上述特點(diǎn)是因?yàn)槠咸亚蚓鸀樾柩趸蚣嫘詤捬酰m其對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高，在肉湯中生長(zhǎng)迅速，但對(duì)碳水化合物的發(fā)酵反應(yīng)不規(guī)則分解葡萄糖產(chǎn)酸[4]，所以二氧化碳的生產(chǎn)量與速度都不如腸桿菌科細(xì)菌。
發(fā)酵菌報(bào)陽(yáng)時(shí)間要長(zhǎng)于葡萄球菌，生長(zhǎng)曲線的遲緩期與穩(wěn)定期比較平坦，形成一條典型的S線。其形成上述特點(diǎn)是由于非發(fā)酵菌一般為專性需氧菌，培養(yǎng)瓶由于加入血液等耗氧物質(zhì)，影響細(xì)菌的生長(zhǎng)環(huán)境，所以生長(zhǎng)較為緩慢，其生長(zhǎng)期較短，很快就進(jìn)入穩(wěn)定期；其不發(fā)酵糖類，雖能氧化葡萄糖，但產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，導(dǎo)致二氧化碳的生產(chǎn)量與增加的速度不會(huì)有明顯變化，遲緩期與穩(wěn)定期曲線因此較平坦[5]。
鏈球菌與腸球菌報(bào)陽(yáng)時(shí)間與生長(zhǎng)曲線相似，其報(bào)陽(yáng)時(shí)間要長(zhǎng)于非發(fā)酵菌，生長(zhǎng)曲線的遲緩期與穩(wěn)定期較平，生長(zhǎng)期較陡。其形成上述特點(diǎn)是由于鏈球菌為需氧、微需氧或厭氧菌，營(yíng)養(yǎng)要求高，在普通培養(yǎng)基不易生長(zhǎng)，有些菌株還需要特殊的生長(zhǎng)因子，對(duì)糖分解能力不定，導(dǎo)致其生長(zhǎng)緩慢及二氧化碳的生長(zhǎng)量少。腸球菌為需氧和兼性厭氧菌，對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求，分解糖類情況、生長(zhǎng)速度與鏈球菌相似，所以其報(bào)陽(yáng)時(shí)間與生長(zhǎng)曲線與鏈球菌相似。這些報(bào)陽(yáng)的鏈球菌中有一株肺炎鏈球菌很奇怪，培養(yǎng)液中菌株的革蘭染色總?cè)境筛锾m陰性球桿菌。有文章報(bào)道：肺炎鏈球菌在血培養(yǎng)報(bào)陽(yáng)6h為革蘭陰性球桿狀[6]。這與肺炎鏈球菌自溶有關(guān)。
念珠菌的報(bào)陽(yáng)時(shí)間要長(zhǎng)于鏈球菌與腸球菌，整條生長(zhǎng)曲線較圓滑，沒(méi)有突出的棱角。這可能與念珠菌的繁殖方式及分解糖類物質(zhì)時(shí)生長(zhǎng)二氧化碳的能力有關(guān)[7]。
布魯菌報(bào)陽(yáng)時(shí)間最遲，大概在3d左右，生長(zhǎng)曲線與非發(fā)酵菌相似，遲緩期與穩(wěn)定期較平坦，對(duì)數(shù)期所對(duì)應(yīng)的縱坐標(biāo)較短。這與布魯菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求高，生長(zhǎng)緩慢有關(guān)。如果遇到布魯菌此類的生長(zhǎng)曲線，做好生物安全防護(hù)，因?yàn)槠浔徽J(rèn)為潛在的生物恐怖病原菌，可以引起實(shí)驗(yàn)室爆發(fā)感染[8，9]。
本次研究中有13例假陽(yáng)性，出現(xiàn)假陽(yáng)性的原因可能是：⑴血培養(yǎng)儀的外界溫度的變化；⑵電源電壓不穩(wěn)定；⑶血培養(yǎng)瓶沒(méi)有常溫避光保存，長(zhǎng)時(shí)間被陽(yáng)光直射；⑷細(xì)胞本身也能發(fā)酵產(chǎn)生CO2，在抽血量超過(guò)推薦采血量或推薦采血量下含有大量的細(xì)胞(如白血病、真紅細(xì)胞增多癥等疾病)的情況下會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性的出現(xiàn)；⑸某些原因(如酸中毒、輸入大量液體)導(dǎo)致標(biāo)本本身PH值偏酸性導(dǎo)致出現(xiàn)假陽(yáng)性[10]。
通過(guò)觀察Bact/Alert 3D血培養(yǎng)儀報(bào)陽(yáng)時(shí)間及生長(zhǎng)曲線，可以幫助實(shí)驗(yàn)室做正確的一級(jí)報(bào)告和預(yù)測(cè)可能的細(xì)菌類型，防止布魯菌感染實(shí)驗(yàn)室工作人員，為臨床用藥提供更為及時(shí)、可靠的指導(dǎo)。
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