鏈霉菌培養(yǎng)基的配制步驟及生長(zhǎng)曲線的測(cè)定方法
一種鏈霉菌培養(yǎng)基的配制步驟、生長(zhǎng)曲線的測(cè)定方法，包括以下步驟：
⑴鏈霉菌活化培養(yǎng)：將保藏于-80℃冰箱中的鏈霉菌涂布在MS固體平板培養(yǎng)基上，并在28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7天，即得平板菌種；
⑵鏈霉菌液體培養(yǎng)及時(shí)間梯度取樣：在生長(zhǎng)良好的平板菌種上取1cm2的孢子接種于裝液量為10%的高氏一號(hào)液體培養(yǎng)基中，在28℃、160rpm的條件下培養(yǎng)；接種后每12h取一次樣品，均勻分散菌絲體后使用去除尖端的1mL移液器吸頭吸取菌液1mL，每個(gè)時(shí)間梯度取樣設(shè)置三個(gè)平行；
⑶配制TTC溶液：稱取2,3,5-氯化三苯基四氮唑粉末0.1g，放置在避光的離心管中，加入10mL濃度為10mg/mL的常溫保存的PBS溶解，過(guò)濾除菌后每200μL TTC溶液分裝在1.5mL的離心管中；⑷鏈霉菌與TTC反應(yīng)：將TTC溶液以1%比例加入到步驟⑵取出的不同時(shí)間段樣品中，室溫避光反應(yīng)30min，此時(shí)TTC反應(yīng)后反應(yīng)液中生成紅色沉淀三苯基甲臢；
⑸吸光度測(cè)定：將反應(yīng)液離心、去除上清并收集沉淀；隨后向該沉淀中加入500μL二甲基亞砜溶液，室溫避光溶解30min，形成紅色溶液，該紅色溶液離心后取上清液各200μL，加入96孔板中，以DMSO溶液作為空白對(duì)照，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度；
⑹生長(zhǎng)曲線繪制：每個(gè)時(shí)間段樣品的吸光度設(shè)置三個(gè)平行，使用AVERAGE函數(shù)求平均值，使用STDEVP函數(shù)計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)誤差；然后以測(cè)定時(shí)間為X軸，以490nm處的吸光值為Y軸，繪制散點(diǎn)圖，對(duì)散點(diǎn)圖進(jìn)行非線性擬合，繪制生長(zhǎng)曲線并得到擬合方程。
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