基于ELISA和細菌生長曲線應(yīng)用的結(jié)合定量檢測腸炎沙門氏菌（二）
2結(jié)果
2.1 vidas檢測值與菌濃度關(guān)系及驗證
本文發(fā)現(xiàn)，Vidas測試值與沙門氏菌濃度(對數(shù)值)函數(shù)關(guān)系為y=0.102x3-0.648x2+1.563x+5.826，相關(guān)系數(shù)R2=0.994，X值適應(yīng)范圍0.2～3.8，對應(yīng)沙門氏菌濃度范圍約106～108cfu/ml，即vidas對沙門氏菌檢測底限約在106cfu/ml，而菌濃度超過108cfu/ml會出現(xiàn)x值鈍化狀態(tài)，可能與抗原抗體結(jié)合飽和有關(guān)。取經(jīng)過一系列稀釋梯度的腸炎沙門氏菌液6管分別對其進行vidas檢測和使用3 M測試片計數(shù)進行了驗證試驗。通過驗證發(fā)現(xiàn)，vidas檢測計算值與測試片所得值相對誤差最小0.13%，最大2.50%，平均相對誤差1.33%。見圖1、表1。
2.2腸炎沙門氏菌在TTB和SC中生長曲線的建立
我們比較腸炎沙門氏菌若干梯度在sc增菌液36℃培養(yǎng)生長曲線發(fā)現(xiàn)，生長曲線對數(shù)期的中后期培養(yǎng)8～10 h是進行vidas檢測較好時機，而vidas最佳檢測區(qū)間在沙門氏菌濃度在106cfu/ml到108cfu/ml，這時各梯度生長曲線區(qū)分度分較好，進入平穩(wěn)期曲線則近于粘合。橫坐標(biāo)為培養(yǎng)時間(h)縱坐標(biāo)我們發(fā)現(xiàn)腸炎沙門氏菌在TTB培養(yǎng)基中生長曲線的對數(shù)期要短些，培養(yǎng)12 h后基本進入穩(wěn)定期。其中接種1 cfu/ml為例經(jīng)過2 h的調(diào)整期進入對數(shù)期，經(jīng)過約14 h后進入穩(wěn)定期，不同接種濃度沙門氏菌在調(diào)整期都是2 h，不同的是濃度越高對數(shù)期時間越短更早的進入穩(wěn)定期。見圖2、3。
圖1 Vidas測試值橫坐標(biāo)與菌濃度縱坐標(biāo)(取對數(shù)值)函數(shù)關(guān)系
表1驗證試驗中通過vidas檢測得到數(shù)值代入公式計算值與實測值對比分析
圖2腸炎沙門氏菌若干稀釋梯度在SC增菌液36度培養(yǎng)生長曲線
圖3腸炎沙門氏菌若干稀釋梯度在TTB增菌液42度培養(yǎng)生長曲線
2.3通過生長曲線對人為污染樣品的檢測本文發(fā)現(xiàn)，在SC增菌液中，冷鮮豬肉模擬樣品相對誤差較大，其余樣本誤差均在10%以內(nèi);在TTB增菌液中，冷鮮豬肉模擬樣品相對誤差在28.6%，而其他樣本誤差均在10.0%以內(nèi)。見表2～5。
2.4干擾實驗本文發(fā)現(xiàn)，干擾試驗中對含有干擾菌的樣品檢測與不含干擾菌的檢測誤差平均值為0.17，相對誤差平均值在11.0%。見表6。
表2加入系列濃度沙門氏菌的人為污染樣品在sc增菌液中增菌9 h后vidas檢測
表3實際添加腸炎沙門氏濃度和檢測值比較分析%
表6第1組樣品和第2組添加干擾菌的樣品的增菌液初始沙門氏菌濃度估算cfu/ml
3討論
沙門氏菌是影響食品安全的主要微生物之一。沙門氏菌病是公共衛(wèi)生學(xué)上重要的人畜共患病之一，沙門氏菌引起的食物中毒在各國細菌性食物中毒中常列榜首，現(xiàn)有規(guī)定中食品中不得檢出沙門氏菌［6，7］。但是目前食品中沙門氏菌的定量檢測方法相對較少，且存在諸多的不足。本課題對鮮肉及制品中腸炎沙門氏菌定量檢測研究，基于沙門氏菌在選擇性增菌液中的生長曲線。選擇性增菌液對干擾菌會有一定的抑制作用，同時還能促進沙門氏菌的生長，這樣能夠更好的對目標(biāo)菌的分離。通過生長曲線可以看出，無論接種濃度大小，都經(jīng)歷2 h停滯期(適應(yīng)期)然后進入對數(shù)生長期，對數(shù)生長期隨著接種菌濃度增加而縮短，進過培養(yǎng)9～16 h不同接種濃度沙門氏菌基本上都到達平穩(wěn)期菌含量在(5～8)×108cfu/ml。在對數(shù)生長期不同接種濃度沙門氏菌形成斜率基本相同的平行斜線，如在SC增菌液中對數(shù)期生長曲線斜率在0.71～0.73。對數(shù)生長期某一定時間不同接種濃度的沙門氏菌增殖達到濃度形成一定斜率的直線，如SC增菌中培養(yǎng)9 h時得出方程y=1.028X-5.202相關(guān)系數(shù)R2=0.995，根據(jù)此方程和此時增菌液沙門氏菌濃度x可以計算出增菌液初始接種濃度。本文中使用vidas對增菌液濃度檢測根據(jù)檢測值與菌濃度數(shù)學(xué)模型y=0.102x3-0.648x2+1.563x+5.826相關(guān)系數(shù)R2=0.994(0.2＜x＜3.8)因為vidas檢測底限在106cfu/ml此時檢測值接近0.2，此方法在10 h時檢測限在2 cfu/ml附近。但是如果使用熒光定量PCR檢出限100 cfu/ml，能夠定量到1 cfu/100 ml［8-10］。
本方法是對鮮肉類及制品直接使用SC或TTB增菌根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)SN/T0040-1992出口食品沙門氏菌屬(包括亞利桑那菌)計數(shù)檢驗方法。本使用腸炎沙門氏菌為模型進行的研究，如果擴展到其他類型沙門氏菌還需要具體探索其他菌在SC或TTB中的生長模型。同時，本文探索基于ELISA-生長曲線原理來對沙門氏菌定量研究的方法，也可擴展到對其他菌的定量研究。
基于ELISA和細菌生長曲線應(yīng)用的結(jié)合定量檢測腸炎沙門氏菌（一）
基于ELISA和細菌生長曲線應(yīng)用的結(jié)合定量檢測腸炎沙門氏菌（二）
相關(guān)新聞推薦
1、無性型蟲草菌株qsun-1發(fā)酵培養(yǎng)基組成成分優(yōu)化及生長影響因素