嗜熱鏈球菌生長曲線繪制：分光光度法VS直接計(jì)數(shù)法
分光光度法和直接計(jì)數(shù)法整體比較嗜熱鏈球菌在適宜生長條件下菌體細(xì)胞生長出現(xiàn)4個(gè)階段:調(diào)整期、對數(shù)期、穩(wěn)定期、衰亡期。
生長曲線反映了嗜熱鏈球菌在培養(yǎng)過程中的繁殖規(guī)律，同一嗜熱鏈球菌在不同培養(yǎng)條件下的生長曲線不同，不同測定方法測得的生長曲線也不同。目前，主要采用分光光度法和直接計(jì)數(shù)法測定生長曲線。
前者所測為包含已死亡菌體和因菌體自溶產(chǎn)生的吸光值，并且據(jù)朗伯—比爾定律，各類低濃度溶液吸光值定量測定的依據(jù)，濃度過高或過低均影響測量結(jié)果的準(zhǔn)確性。后者所測為實(shí)際觀察并計(jì)數(shù)得到的菌體細(xì)胞數(shù)量。用分光光度法和直接計(jì)數(shù)法分別測定M17培養(yǎng)基雙麥麥精添加量為9.36g時(shí)，嗜熱鏈球菌不同生長時(shí)間培養(yǎng)液的OD600值和菌體數(shù)量，繪制其生長曲線，并對2種測定方法所繪制的生長曲線進(jìn)行比較，分析差異，見圖1。
圖1嗜熱鏈球菌生長曲線
兩條曲線通過相關(guān)系數(shù)分析，相似度比較高，相似度系數(shù)為0.977。說明嗜熱鏈球菌培養(yǎng)液OD600值的吸光度與直接計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)量呈強(qiáng)相關(guān)性。分光光度法和直接計(jì)數(shù)法測定的生長曲線在對數(shù)期以前基本一致。在對數(shù)期，直接計(jì)數(shù)法所得生長曲線整體高于分光光度法所得生長曲線，可能由于菌體繁殖比較旺盛，使得菌體在培養(yǎng)基中成活率較高。穩(wěn)定期分光光度法高于直接計(jì)數(shù)法，可能由于穩(wěn)定期內(nèi)菌體的自溶速度小于其緩慢的增長速度，同時(shí)隨著代謝產(chǎn)物增多，使吸光度略微偏高。
嗜熱鏈球菌在對數(shù)期的OD600值與直接計(jì)數(shù)法測得嗜熱鏈球菌的關(guān)系以O(shè)D600值為橫坐標(biāo)，直接計(jì)數(shù)法測定的細(xì)胞數(shù)量為縱坐標(biāo)，繪制XY散點(diǎn)圖，利用最小二乘法繪出兩者的回歸曲線，結(jié)果見圖1。回歸方程為y=－11.489x2+35.968x+6.1745(R2=0.9998)，回歸方程具有極顯著意義。
圖2對數(shù)生長期OD值與直接計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)量的關(guān)系
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