鴨瘟病毒DEV gG 基因缺失株的構建、體外生長曲線和蝕斑形成能力測定
鴨瘟病毒（DEV）是引起鴨高致死率的重要病原。為探究gG基因對DEV疫苗株免疫保護效果的影響，本研究在本實驗室已構建的DEV疫苗株細菌人工染色體感染性克隆pDEV-EF1的基礎上，通過“Red E/T兩步重組”技術，構建DEV gG基因缺失的感染性克隆pDEV-ΔgG，對其進行酶切、PCR及測序鑒定。將pDEV-EF1和pDEV-ΔgG分別轉染CEF細胞，待兩組細胞均出現熒光后，收獲細胞培養物反復凍融3次后，連續傳至20代，每隔5代采用PCR及測序鑒定，分析pDEV-ΔgG的遺傳穩定性，并采用western blot進一步鑒定，結果顯示，正確構建gG基因缺失株，且能在CEF上穩定傳代，命名為rDEV-ΔgG。將rDEV-ΔgG和親本病毒rDEV-EF1接種CEF，測定體外生長曲線和測定蝕斑形成能力。
結果顯示，rDEV-ΔgG和rDEV-EF1的病毒滴度在24 h~72 h呈上升趨勢，均在72 h時達到高峰，且二者的病毒滴度無顯著差異；rDEV-ΔgG感染CEF后形成的蝕斑較親本病毒rDEVEF1產生的蝕斑面積減小27.37%。將rDEV-ΔgG以不同劑量免疫30日齡麻鴨2周后，進行DEV攻毒試驗，觀察各組鴨的臨床癥狀，統計各組麻鴨的存活率，攻毒后1 d到9 d采集各組鴨肛拭子，并在攻毒后2 d、4 d、6 d和8 d各組分別隨機剖殺3只麻鴨，取其各臟器組織，經熒光定量PCR分別檢測各組麻鴨各臟器病毒載量及排毒情況。攻毒試驗結果顯示，1.0×105 TCID50和1.0×104 TCID50 rDEV-ΔgG免疫的麻鴨在強毒攻擊下的保護率較相同劑量rDEV-EF1免疫的麻鴨均下降17%。
各臟器病毒載量結果顯示，在攻毒后2 d麻鴨胸腺的病毒載量最高，其次是脾臟，在攻毒后4 d，麻鴨食道、泄殖腔、胸腺病毒載量較高。泄殖腔排毒結果顯示，攻毒后1 d~4 d泄殖腔排毒量持續升高，并攻毒后4 d各組麻鴨的排毒量達到峰值。本研究比較了gG基因缺失病毒rDEV-ΔgG和親本病毒rDEV-EF1的生物學特性和免疫保護效果差異，為明確gG在DEV基因組中的功能提供研究基礎。