生活飲用水菌落總數(shù)測定方法及影響因素（一）
摘要：菌落總數(shù)是評(píng)價(jià)水質(zhì)污染程度的主要衛(wèi)生指標(biāo),因此對(duì)菌落總數(shù)檢測的質(zhì)量控制就顯得尤為重要。就目前而言,菌落總數(shù)的數(shù)據(jù)質(zhì)控始終沒有一個(gè)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn),并且根據(jù)菌落數(shù)量的多少會(huì)有所不同。根據(jù)實(shí)際工作的特點(diǎn),對(duì)引起菌落總數(shù)檢測結(jié)果誤差的因素進(jìn)行分析討論,并提出相應(yīng)的控制措施。
一、材料與方法
1.樣品來源
美國IDEXX菌落總數(shù)質(zhì)控樣品、濰坊市中心城區(qū)管網(wǎng)末梢水及濰坊市峽山水庫地表水。
2.檢測方法
依據(jù)《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法微生物指標(biāo)》（GB/T 5750.12—2006）中的平皿計(jì)數(shù)法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分析，培養(yǎng)基采用北京奧博星生物科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)的營養(yǎng)瓊脂，批號(hào)為20140102，并在有效期內(nèi)使用。
二、結(jié)果與分析
在水質(zhì)菌落總數(shù)檢測過程中，對(duì)檢測結(jié)果引起誤差的因素主要有培養(yǎng)基、重復(fù)性、檢測時(shí)間、培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)溫度、傾注平板時(shí)培養(yǎng)基溫度、同一稀釋度平行平板讀數(shù)、不同稀釋度平行平板讀數(shù)、不同實(shí)驗(yàn)人員對(duì)同一水樣菌落總數(shù)的讀數(shù)等。結(jié)合山東省濰坊市水質(zhì)的特點(diǎn)，主要討論培養(yǎng)基、檢測時(shí)間、培養(yǎng)時(shí)間、平行平板重復(fù)性、不同人員對(duì)同一平板讀數(shù)等5個(gè)因素。
1.培養(yǎng)基對(duì)檢測結(jié)果的影響及控制措施
培養(yǎng)基是微生物賴以生存的生命之本，培養(yǎng)基制備直接影響著微生物的生長，進(jìn)而影響了檢測結(jié)果。因此，應(yīng)嚴(yán)格按照培養(yǎng)基的配方及說明認(rèn)真制備培養(yǎng)基，每批培養(yǎng)基在使用前都要進(jìn)行符合性驗(yàn)證，主要包括陽性對(duì)照及無菌試驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)采用大腸埃希氏菌（ATCC25922）進(jìn)行劃線培養(yǎng)，計(jì)算生長指數(shù)G，結(jié)果為G=13（G≥6時(shí)培養(yǎng)基可以接受），并且經(jīng)空白測定證明無菌。因此，本批次培養(yǎng)基可以進(jìn)行菌落總數(shù)的測定。
2.檢測時(shí)間對(duì)菌落總數(shù)結(jié)果的影響
國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定微生物水樣保存時(shí)間為4 h，但是在實(shí)際工作中有時(shí)候因采樣地點(diǎn)路程較遠(yuǎn)等因素，不能在4 h內(nèi)完成檢測。將質(zhì)控菌片溶解后立即檢測，經(jīng)4℃冷藏存放2 h、4 h、6 h、8 h、23 h、24 h、30 h、48 h、72 h后分別檢測，結(jié)果如圖1所示。
從圖1可以看出，對(duì)質(zhì)控菌片用無菌生理鹽水溶解后立即檢測、間隔2 h到23 h后檢測，菌落總數(shù)結(jié)果變化不明顯，均在20 CFU/mL左右，符合真值20 CFU/mL；從24 h開始，數(shù)值呈現(xiàn)較大的變化趨勢(shì)，并逐漸超出質(zhì)控樣可接受范圍（2～38 CFU/mL）。由此可見，檢測時(shí)間對(duì)菌落總數(shù)結(jié)果可靠性影響較大，由于細(xì)菌的繁殖隨時(shí)間呈幾何級(jí)數(shù)增長，在室溫條件下存放水樣更會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌的繁殖，因此微生物水樣必須在4℃冷藏，取來后應(yīng)立即檢測，最長不宜超過24 h。
3.培養(yǎng)時(shí)間對(duì)菌落總數(shù)結(jié)果的影響
分別對(duì)菌落總數(shù)質(zhì)控樣品和含菌量較高的水樣品進(jìn)行菌落總數(shù)檢測，不同的培養(yǎng)時(shí)間對(duì)菌落總數(shù)的影響呈現(xiàn)一定的變化趨勢(shì)，具體如圖2所示。
從圖2可以看出，細(xì)菌種類單一的質(zhì)控樣品培養(yǎng)在24 h～48 h～72 h之間，結(jié)果沒有發(fā)生較大的變化，在平板計(jì)數(shù)時(shí)只是菌落大小隨時(shí)間增長有所增大，數(shù)量變化不大。然而，含菌量較高的水樣品，細(xì)菌種類較復(fù)雜，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，變化趨勢(shì)比較明顯。培養(yǎng)24 h時(shí)菌落總數(shù)小于200 CFU/mL，在24 h～46 h間結(jié)果逐漸上升，在46 h～50 h間菌落總數(shù)基本沒有發(fā)生變化，從70 h開始菌落總數(shù)明顯增高。因此，在日常水樣檢測中，培養(yǎng)時(shí)間是影響結(jié)果準(zhǔn)確的主要因素之一，應(yīng)規(guī)范操作，將培養(yǎng)時(shí)間控制在48±2 h為宜。
4.不同檢測人員對(duì)同一菌落讀數(shù)結(jié)果的影響
采用7位檢測員對(duì)同一平板進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)算平均值、誤差率以及可接受區(qū)間，具體結(jié)果見表1。
表1 7位實(shí)驗(yàn)人員對(duì)同一平板計(jì)數(shù)的結(jié)果
從表1中可以看出，7位實(shí)驗(yàn)人員的計(jì)數(shù)結(jié)果均在可接受范圍之內(nèi)，與均值誤差率小于5%，最大值與最小值誤差為8.86%，滿足不同人員對(duì)同一平板計(jì)數(shù)誤差小于18.2%的北歐標(biāo)準(zhǔn)。因此，就本實(shí)驗(yàn)室而言，不同人員對(duì)同一平板讀數(shù)引起的誤差較小，在實(shí)際工作中可以作為次要因素考慮。
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