低聚果糖在體外對(duì)大腸桿菌、嗜酸乳桿菌生長(zhǎng)曲線的影響（二）
1.4.5大腸桿菌OD值測(cè)定
取LB肉湯培養(yǎng)基200μL于96孔板內(nèi)，接種稀釋的10??倍大腸桿菌菌液100μL，每組3個(gè)平行，置36±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h，每隔3個(gè)小時(shí)630nm測(cè)定吸光度，連續(xù)測(cè)定24h并繪制生長(zhǎng)曲線。
1.4.6嗜酸乳桿菌OD值測(cè)定
分別取MRS肉湯培養(yǎng)基200μL于96孔板內(nèi)，接種稀釋的10??倍乳酸桿菌菌液100μL，每組3個(gè)平行，置36±1℃溫箱內(nèi)厭氧培養(yǎng)48h，每隔3個(gè)小時(shí)測(cè)定630nm的吸光度，連續(xù)測(cè)定48小時(shí)并繪制生長(zhǎng)曲線。
1.5試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)
試驗(yàn)中所有數(shù)據(jù)采用SPSS20.0軟件中單因素方差分析(ONE-WAY ANOVA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，P<0.05為差異顯著，P>0.05為差異不顯著，均采用Duncan法進(jìn)行多重比較。
2結(jié)果
2.1低聚果糖對(duì)大腸桿菌的影響
低聚果糖對(duì)大腸桿菌活菌數(shù)的影響:活菌計(jì)數(shù)試驗(yàn)結(jié)果顯示，大腸桿菌在20g/L、30g/L、40g/L濃度的低聚果糖作用下，對(duì)應(yīng)的菌落數(shù)分別為5.10×10?cfu/mL、4.17×10?cfu/mL、5.53×10?cfu/mL，對(duì)照組菌落數(shù)為6.53×10?cfu/mL，其中低聚果糖30g/L組大腸桿菌活菌數(shù)顯著(P<0.05)且低于對(duì)照組，其余兩組活菌數(shù)雖低于對(duì)照組但無(wú)差異性(P>0.05)，具體變化如圖1所示。
低聚果糖對(duì)大腸桿菌OD值的影響:通過(guò)測(cè)量大腸桿菌生長(zhǎng)曲線，如圖2所示，大腸桿菌在轉(zhuǎn)接后的6小時(shí)內(nèi)生長(zhǎng)速度比較緩慢，在6~9h內(nèi)生長(zhǎng)速度較快，9h后菌體濃度開始趨于穩(wěn)定，可知大腸桿菌可以利用低聚果糖。圖2中，20g/L低聚果糖組在0~24h增殖速度相比對(duì)照組、30g/L、40g/L較快;18h以后對(duì)照組大腸桿菌濃度比其他二組高，且18h開始其菌體濃度趨于穩(wěn)定，此時(shí)大腸桿菌在630nm的OD值分別為:0.89、0.70、0.78、0.79，其中30g/L低聚果糖組大腸桿菌菌體數(shù)量最低。綜上可知，30g/L濃度的低聚果糖可使大腸桿菌的增值速度降低。
2.2低聚果糖對(duì)嗜酸乳桿菌的影響
低聚果糖對(duì)嗜酸乳桿菌活菌數(shù)的影響:活菌計(jì)數(shù)試驗(yàn)結(jié)果顯示，乳酸桿菌在20g/L、30g/L、40g/L濃度的低聚果糖作用下，對(duì)應(yīng)的活菌數(shù)分別為3.57×10?cfu/mL、3.93×10?cfu/mL、3.40×10?cfu/mL，對(duì)照組菌落數(shù)為3.27×10?cfu/mL，其中30g/L低聚果糖組較其他組增值效果明顯(P>0.05);20g/L、40g/L與對(duì)照組嗜酸乳桿菌菌落數(shù)相比，雖有增長(zhǎng)，但無(wú)顯著差異性(P>0.05)。說(shuō)明添加一定量的低聚果糖對(duì)嗜酸乳桿菌均起增值作用，其中30g/L添加量效果較好。具體變化如圖3所示。
低聚果糖對(duì)嗜酸乳桿菌OD值的影響:通過(guò)測(cè)量嗜酸乳桿菌生長(zhǎng)曲線，如圖4所示，在轉(zhuǎn)接后的15h內(nèi)乳酸菌的生長(zhǎng)比較緩慢，在15~30h內(nèi)乳酸菌生長(zhǎng)速度較快，在36h開始菌體濃度開始趨于穩(wěn)定，此時(shí)嗜酸乳桿菌在630nm的OD值分別為:1.18、1.20、0.98、1.22。圖4中，在24h時(shí)40g/L濃度組嗜酸乳桿菌的增殖速度開始降低;綜上可知，40g/L濃度低聚果糖使嗜酸乳桿菌的增值速度降低，添加低聚果糖20g/L、30g/L與對(duì)照組接近無(wú)顯著差異。
3結(jié)論與分析
腸道菌群對(duì)腸道有著重要的保護(hù)作用，正常比例的腸道菌群可以有效的抵御外來(lái)病原的入侵，維持腸道內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和微生態(tài)平衡。大腸桿菌是人及各種動(dòng)物腸道中重要的正常寄生菌，嗜酸乳桿菌是微生態(tài)平衡中起重要作用的菌種之一，體外實(shí)驗(yàn)采用活菌計(jì)數(shù)法，以活菌數(shù)量計(jì)數(shù)、活菌生長(zhǎng)曲線為判斷標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)比了兩菌種的生長(zhǎng)情況，可以清晰地看出低聚果糖對(duì)大腸桿菌和乳酸桿菌這兩種重要的腸道菌的生長(zhǎng)影響。
在以低聚果糖為唯一碳源的麥康凱培養(yǎng)基和MRS培養(yǎng)基上培養(yǎng)大腸桿菌和乳酸桿菌，結(jié)果顯示，低聚果糖在體外可以抑制大腸桿菌的生長(zhǎng)，促進(jìn)嗜酸乳桿菌的生長(zhǎng)，適宜濃度為30g/L，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與Blaut等人對(duì)功能性低聚糖能夠抑制有害菌促進(jìn)有益菌生長(zhǎng)的研究結(jié)果一致，為動(dòng)物臨床試驗(yàn)以及推廣提供科學(xué)依據(jù)。
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