亞胺培南&鹽酸小檗堿可提高對耐碳青霉烯類銅綠假單胞菌抑制作用——摘要、材料與方法
摘要：目的評價亞胺培南、鹽酸小檗堿兩種藥物聯(lián)合使用對耐碳青霉烯類銅綠假單胞菌(CPA)體外抗菌活性產(chǎn)生的影響，探討兩種聯(lián)合用藥方案可行性，為抗菌藥物聯(lián)合使用合理性進一步提高可靠參考依據(jù)。方法收集2016年2月～2017年5月本院臨床分離的80株CPA，采用肉湯稀釋法實施亞胺培南、鹽酸小檗堿耐碳青霉烯類銅綠假單胞菌最小抑菌濃度(MIC)檢測;采用棋盤稀釋法實施亞胺培南聯(lián)合鹽酸小檗堿對CPA的MIC，將聯(lián)合指數(shù)(FIC)計算出來。結(jié)果單獨使用鹽酸小檗堿、亞胺培南時，兩種藥物對CPA的MIC的均值分別為261.00、8.75μg/mL;兩藥聯(lián)合使用后，亞胺培南、鹽酸小檗堿對CPA的MIC值均有明顯減少，均值分別下降為8.11、4.48μg/mL;兩藥聯(lián)用時，對88.42%的50株CPA表現(xiàn)為相加抗菌作用，對6.56%CPA表現(xiàn)為協(xié)同抗菌作用，對5.02%CPA表現(xiàn)出無拮抗作用。結(jié)論亞胺培南、鹽酸小檗堿聯(lián)合使用時，二者主要表現(xiàn)為協(xié)同作用，表明聯(lián)合能夠有效提高兩種藥物各自對CPA的抗菌敏感性，因此將該方案應(yīng)用于CPA感染治療可能獲得更理想效果。
銅綠假單胞菌（P.Aeruginosa）又可稱為綠膿桿菌，為廣泛分布自然界中的一類重要細菌之一，屬于較為常見的一種條件致病菌，同時也是導(dǎo)致院內(nèi)感染發(fā)生的一類重要致病菌。該病菌感染可會引起敗血癥、呼吸道感染、尿路感染、傷口感染等。臨床數(shù)據(jù)顯示，近年來，銅綠假單胞菌的分離及耐藥率均表現(xiàn)出明顯遞增趨勢，且對碳青霉稀類耐藥率有明顯升高，有廣泛耐藥菌株出現(xiàn)，這大大增加了疾病臨床治療難度，影響疾病治療效果及預(yù)后。因此，加強對該類細菌耐藥情況進行深入研究具有重要臨床意義。本研究主要探討同時使用鹽酸小檗堿、亞胺培南兩種藥物對CPA體外抗菌活性產(chǎn)生的作用，現(xiàn)做如下報道。
1資料與方法
1.1一般材料
選取2016年2月～2017年5月本院臨床分離的80株CPA，實施法國梅里埃VITEK2-CompactT檢測，同時實施Hodge實驗，根據(jù)檢測及實驗結(jié)果選取50株耐碳氫酶烯類銅綠假單胞菌。質(zhì)控菌株27853由中國衛(wèi)生部臨檢中心提供。研究所用抗菌藥物：亞胺培南，純度：98%，批號：160421，規(guī)格：5g/支；鹽酸小檗堿，純度：98%，批號：160528，規(guī)格；1g/支。兩種藥物均為上海源葉生物科技有限公司提供。
1.2方法
1.2.1制備菌懸液
實施菌種均實施復(fù)融、轉(zhuǎn)種以及分離培養(yǎng)，于相同平板取1～2個性狀相似的菌落，將其接種至LB液體培養(yǎng)基內(nèi)進行10～12h的培養(yǎng)。使用RPMI1640液體培養(yǎng)基將LB培養(yǎng)液密度調(diào)節(jié)為2～6×108CFU/L菌懸液。實施實驗時用RP-MI1640培養(yǎng)基將LB培養(yǎng)液稀釋至100倍，獲得接種菌懸液（密度為2～6×108CFU/L）。
1.2.2配制藥物濃度
使用無菌蒸餾水分別將亞胺培南、鹽酸小檗堿干粉堿配成256μg/mL、2048μg/mL原液，再實施NCCLS抗生素藥敏微量稀釋。亞胺培南最終濃度控制為0.125～128μg/mL。
1.2.3兩種藥物單獨藥敏試驗使用NCCLS微量倍比稀釋實施亞胺培南、鹽酸小檗堿稀釋后，在孵育箱（溫度：37℃）中放置18～24h后觀察結(jié)果。
1.2.4鹽酸小檗堿交叉聯(lián)合抗真菌藥物藥敏試驗
選用棋盤微量稀釋法檢實施藥物同時應(yīng)用作用。采用稀釋度為9個，最高濃度使其MIC的4倍，實施依次倍比稀釋，具體倍比濃度為1、1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256倍。在Biosense系統(tǒng)的96孔培養(yǎng)板上按照縱、橫兩列聯(lián)合兩種藥物稀釋。接種菌量選擇為1×105CFU/mL，將銅綠假單胞菌放置于孵育箱（溫度：37℃）中，放置時間為18～24h，然后仔細觀察細菌的生長情況。計算出部分抑菌濃度指數(shù)（FIC），并以該值為根據(jù)對聯(lián)合藥敏試驗效果進行評估。
1.2.5單藥最低抑制濃度（MIC）值測定
MIC值通過微量肉湯倍比稀釋法檢測。制備單藥孔板：去96孔微型平板，在1～12各孔加入100μL肉湯，首列各孔加入100μL鹽酸小檗堿藥液（128μg/mL），實施倍比稀釋，使第1～11孔鹽酸小檗堿濃度稀釋至0.065～64μg/mL。在1～12各孔加入100μL已配置好菌懸液，使第1～11孔鹽酸小檗堿濃度稀釋為0.03～32μg/mL，將12孔作為陰性對照。按照如上方法實施亞胺培南單藥孔板制備，亞胺培南最終濃度控制為0.25～256μg/mL。放置于溫度為（35±2）℃溫箱中進行18～24h培養(yǎng)，然后觀察結(jié)果，并記錄MIC。
1.2.6計算FIC及效果評估
MIC甲藥聯(lián)合/MIC甲藥單用+MIC乙藥聯(lián)合/MIC=FIC。乙藥單用抗菌效果判定：（1）兩藥協(xié)同作用：FIC指數(shù)≤0.5；（2）兩藥相加作用：FIC指數(shù)≤1；（3）兩藥無關(guān)作用：1＜FIC指數(shù)≤2；（4）兩藥為拮抗作用：FIC指數(shù)＞2。
1.3統(tǒng)計學(xué)分析
試驗研究數(shù)據(jù)資料均通過SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。MIC值等計量數(shù)據(jù)對比實施t檢驗處理，選用（±s）表示。以P＜0.05表示相互比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
亞胺培南&鹽酸小檗堿可提高對耐碳青霉烯類銅綠假單胞菌抑制作用——摘要、材料與方法
亞胺培南&鹽酸小檗堿可提高對耐碳青霉烯類銅綠假單胞菌抑制作用——結(jié)果、討論
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