瑞香狼毒葉（斷腸草）對金黃色葡萄球菌和石膏樣毛癬菌生長曲線的影響——結(jié)果、討論
2結(jié)果
2.1乙醇粗提物的抑菌活性
結(jié)果見表1，2。從表1和表2可以看出瑞香狼毒葉95%乙醇提取物和無水乙醇提取物對金黃色葡萄球菌和石膏樣毛癬菌都有抑菌作用，95%乙醇提取物抑菌效果明顯強(qiáng)于無水乙醇提取物，對金黃色葡萄球菌的抑菌效果略強(qiáng)于石膏樣毛癬菌。當(dāng)提取物濃度為100 mg·mL-1時(shí)，95%乙醇提取物抑菌圈高達(dá)12.8 mm。且隨著提取物濃度的增加兩種提取物抑菌效果也增加。所以選擇95%乙醇提取物作為下一步提取分離活性成分的起始物。
表1 95%乙醇和無水乙醇提取物對金黃色葡萄球菌和石膏樣毛癬菌的抑菌圈直徑
表中數(shù)據(jù)為抑菌圈直徑，0.00表示沒有抑菌圈形成，濾紙片直徑為6.00 mm
2.2 MIC和MBC
結(jié)果見表2。表3可以看出4種萃取物對2種皮膚菌都有不同程度的抑菌和殺菌效果，二氯甲烷萃取物抑菌和殺菌活性最高，其次是丙酮萃取物、甲醇萃取物，石油醚萃取物。二氯甲烷萃取物對金黃色葡萄球菌的MIC和MBC值為0.25 mg·mL-1，對石膏樣毛癬菌MIC和MBC值高達(dá)0.5 mg·mL-1。所以實(shí)驗(yàn)選擇二氯甲烷萃取物樣品作為抑菌機(jī)制研究的樣品。
表2 4種萃取物對金黃色葡萄球菌和石膏毛癬菌的MIC、MBC
2.3鏡檢結(jié)果
結(jié)果見圖1，2。圖1A可以看出石膏樣毛癬菌對照組菌絲分支均勻，節(jié)與節(jié)之間連接緊密，而圖1B處理組的菌絲分支扭曲混亂，節(jié)與節(jié)之間間距大，許多還有脫節(jié)現(xiàn)象，頂端有異常分支及膨大。圖2A可以看出金黃色葡萄球菌對照組菌外表光滑，呈球型串珠狀，而圖2B處理組中菌體間完全粘連在一起呈麻繩狀，菌體扭曲變形呈現(xiàn)不規(guī)則形狀，完全看不出是什么菌種。
2.4生長曲線
結(jié)果見圖3，4。從圖3中可以看出樣品對金黃色葡萄球菌生長曲線影響非常明顯，CK曲線6 h前是延滯期，6～14 h是指數(shù)期，14～20 h是穩(wěn)定期，處理組沒有達(dá)到正常的生長高峰，8 h后就進(jìn)入衰亡期，從曲線可以推斷藥物主要抑制菌的指數(shù)期。圖4中CK生長曲線顯示3～7 d石膏樣毛癬菌出現(xiàn)了快速生長，7 d以后緩慢生長處于穩(wěn)定期，而藥物處理后菌的生長速度明顯減慢，對菌的每個(gè)生長期都有不同程度的抑制。
圖3金黃色葡萄球菌生長曲線圖
圖4石膏樣毛癬菌生長曲線圖
3討論
本文最初提取溶劑選擇乙醇，因?yàn)橐掖际且环N廣譜性溶劑，溶解能力強(qiáng)，溶解范圍廣，同時(shí)在有機(jī)溶劑中它最便宜，毒性最低，安全性最高，所以選擇乙醇作為最先的提取溶劑。萃取溶劑選擇是參考有機(jī)溶劑的介電常數(shù)，石油醚(1.8)、二氯甲烷(9.08)、丙酮(20.7)、甲醇(32.7)，溶劑的極性跟介電常數(shù)成正比，因此選用極性差別大且覆蓋極性范圍廣的這4種溶劑作為萃取溶劑。
藥物處理后鏡檢發(fā)現(xiàn)真菌菌絲生長緩慢，生長明顯受到抑制，菌絲層稀薄，菌絲粗細(xì)不均勻并且扭曲變形，節(jié)與節(jié)之間有斷裂現(xiàn)象。對真菌生長曲線的觀察，主要影響指數(shù)生長期，因此可以推測藥物可能抑制真菌細(xì)胞分裂。具體抑制其中哪些物質(zhì)還有待進(jìn)一步研究。鏡檢發(fā)現(xiàn)細(xì)菌外形粗糙，菌體間粘連扭曲成麻繩狀，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，顯著變形。而干擾細(xì)胞壁合成的藥物常會(huì)引起細(xì)胞形態(tài)的顯著變形，故推測藥物可能阻止或干擾了細(xì)菌細(xì)胞壁的合成來達(dá)到抑菌效果。具體抑菌機(jī)制還需進(jìn)一步研究證實(shí)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，瑞香狼毒葉中含有抑皮膚菌的高活性成分，這些成分的極性與二氯甲烷相近，至于是單體化合物還是混合物還有待進(jìn)一步提取分離。
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