10-十一烯酸聯(lián)合硫酸多黏菌素E的協(xié)同殺菌效果【試驗(yàn)】
摘要: 本文內(nèi)容主要涉及10?十一烯酸聯(lián)合多黏菌素在制備抗菌藥物中的應(yīng)用，抗菌藥物針對的細(xì)菌為大腸桿菌、沙門菌、肺炎克雷伯菌中的一種或多種。抗菌藥物針對的細(xì)菌為耐多黏菌素的細(xì)菌。所述抗菌藥物針對的細(xì)菌為多重耐藥革蘭陰性細(xì)菌。通過棋盤法最小抑菌濃度試驗(yàn)、體外細(xì)菌生長曲線證明10?十一烯酸協(xié)同增效多黏菌素的抗菌活性，提供10?十一烯酸在增效多黏菌素類抗生素抗菌活性中的新用途，可解決多黏菌素臨床耐藥性和治療指數(shù)低等技術(shù)問題。
革蘭陰性菌是臨床常見的病原菌，嚴(yán)重影響人類健康與畜禽健康養(yǎng)殖。多黏菌素是治療多重耐藥革蘭陰性菌感染的重要抗菌藥物之一，然而，近年來，由于臨床治療中不規(guī)范用藥，導(dǎo)致耐藥菌的出現(xiàn)，嚴(yán)重削弱了多黏菌素的臨床治療效果。近年來，新的抗菌藥物研發(fā)停滯不前，利用現(xiàn)有藥物恢復(fù)現(xiàn)有抗生素的效果是一種經(jīng)濟(jì)有效的手段。10-十一烯酸是一種單鏈不飽和脂肪酸，天然存在于人體汗液中，在臨床已被廣泛用于抗真菌治療，能有效抑制真菌的繁殖，常用于治療頭癬、股癬、足癬等皮膚真菌感染及真菌性陰道炎，能有效抑制白念珠菌的生物膜形成；此外，有研究表明，10-十一烯酸與L-精氨酸聯(lián)用后能誘導(dǎo)濃度依賴性腫瘤細(xì)胞死亡。迄今為止，10-十一烯酸作為抗菌佐劑增效抗菌藥物的抗菌活性尚未見報(bào)道。
為了解決多重耐藥革蘭陰性細(xì)菌治療的技術(shù)問題，本文提供一種增強(qiáng)多黏菌素抗菌活性的方法，具體采用10-十一烯酸聯(lián)用多黏菌素，多黏菌素優(yōu)選硫酸多黏菌素E，二者不僅是簡單的功能相加，而是達(dá)到協(xié)同增效抗菌作用。文末附10-十一烯酸和硫酸多黏菌素E的抗菌組合配比，為臨床治療細(xì)菌感染，特別是多重耐藥革蘭陰性細(xì)菌感染，具體如存在多黏菌素耐藥基因(MCR)的細(xì)菌感染提供了新的治療策略。
10-十一烯酸(10-Undecenoic acid)，CAS號：112-38-9，分子式：C11H20O2，分子量：184.28，購買自上海阿拉丁生化科技股份有限公司，純度為95％；稱取一定量的10-十一烯酸使用DMSO配制成濃度為100mg/mL的10-十一烯酸母液，-20℃保存；
硫酸多黏菌素E(硫酸粘桿菌素，Colistin)，CAS號：1264-72-8，分子式：C52H100N16O17S，分子量：1253.53，購買于上海阿拉丁生化科技股份有限公司，純度≥19，000U/mg；稱取一定量的硫酸多黏菌素E配制成濃度為2mg/mL的硫酸多黏菌素E母液，-20℃保存；
使用的細(xì)菌培養(yǎng)基：
CAMHB肉湯培養(yǎng)基購自BD碧迪醫(yī)療器械(上海)有限公司，配制方法如下：稱取22.0g于1L蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，121℃高壓滅菌15min，備用；
MH瓊脂培養(yǎng)基購自北京陸橋技術(shù)股份有限公司，配制方法如下：稱取38.0g于1L蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，121℃高壓滅菌15min，冷至50℃傾注平板備用；
腦心浸液培養(yǎng)基(BHI肉湯培養(yǎng)基)購自北京陸橋技術(shù)股份有限公司，配制方法如下：稱取本品24.5g，加熱攪拌溶解于1L蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min，備用。
10-十一烯酸聯(lián)合硫酸多黏菌素E的協(xié)同殺菌分析：
時(shí)間殺菌曲線試驗(yàn)：
挑取大腸桿菌B2單菌落至BHI肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數(shù)生長期后備用，CAMHB肉湯培養(yǎng)基加入10-十一烯酸、硫酸多黏菌素E、10-十一烯酸和硫酸多黏菌素E混合液，加入菌液使初始菌量為1×106CFU/mL；
分組和劑量如下：
對照組(control)：只含菌液，10-十一烯酸、硫酸多黏菌素E終濃度為0；
10-十一烯酸(10-Undecenoic acid)：10-十一烯酸終濃度分別為2.5mg/mL；
硫酸多黏菌素E組(Colistin)：硫酸多黏菌素E終濃度分別為4μg/mL；
10-十一烯酸和硫酸多黏菌素E聯(lián)合組：終濃度為2.5mg/mL 10-十一烯酸+4μg/mL硫酸多黏菌素E。
將培養(yǎng)液充分混勻后，置于恒溫培養(yǎng)箱中，37℃靜置培養(yǎng)。分別于第1h、3h、6h、12h和24h取100μL菌液涂布于直徑為10cm的MH瓊脂培養(yǎng)板上，培養(yǎng)過夜后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。
試驗(yàn)結(jié)果：
圖10-十一烯酸聯(lián)合硫酸多黏菌素E對大腸桿菌B2的協(xié)同殺菌結(jié)果
如圖所示，針對大腸桿菌B2菌株，與對照組相比，硫酸多黏菌素E單獨(dú)處理對細(xì)菌菌落數(shù)沒有顯著影響，10-十一烯酸單獨(dú)使用后會使活菌數(shù)減少，但與對照組相比，活菌數(shù)減少程度較弱；當(dāng)10-十一烯酸和硫酸多黏菌素E聯(lián)合處理時(shí)，細(xì)菌活菌落數(shù)較對照組與10-十一烯酸或硫酸多黏菌素E單獨(dú)處理組顯著降低，在第1h時(shí)，活菌落數(shù)能降至0Log10
CFU/mL，即該組合濃度下能快速有效殺死細(xì)菌；
這些數(shù)據(jù)表明，10-十一烯酸和硫酸多黏菌素E聯(lián)合處理后對大腸桿菌具有明顯的協(xié)同殺菌功能。
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